怎么给狗狗做布病检查?
1.布鲁氏菌病(brucellosis,也称布病)是一种人畜共患的慢性传染病[5];主要危害家养动物、野生偶蹄兽及人类健康。20 世纪中后期以来,随着世界畜牧业生产布局的调整和全球畜牧业贸易活动的增加,特别是乳品业的发展以及肉牛的广泛引入和传播,使得原分布于亚洲和非洲的一些国家和地区逐渐出现布病疫情暴发流行现象,并在欧美等一些发达国家也相继出现了由进口乳、肉类产品导致的输入性疫情。我国也是布病发病的地区之一,自上世纪80年代起就有关于人患布病的报道;90年代初开始,我国部分地区陆续出现布病暴发流行事件,并呈逐年上升趋势�;2010年卫生部等五部门颁布了《布鲁氏菌病防治工作方案》,但该方案已于2013 年到期失效��目前尚无针对人布病的国家防控规划与策略。 人感染布鲁氏菌后的临床表现复杂多样,通常出现发热、多汗、乏力、肌肉关节酸痛等症状,部分病例还有淋巴结肿大、睾丸炎、关节炎、肝脾肿大等表现,病程一般持续3~6个月,少数可达数年以上。在免疫功能受损者中,可表现为急性感染,甚至发生播散性病变。本病预后较差,约5%~30%患者可遗留生殖系统疾病,严重者可因全身衰竭或脏器损害而死亡[7-11]。 目前诊断方法包括血清学试验、分子生物学检测和人培养鉴定。由于人布鲁氏菌缺乏特异基因型,导致血清学诊断存在一定的局限性,难以用于流行病学调查。同时由于人培养困难且成本高,因此尚未见采用人培养的方法来直接鉴定布病患者的报道[14,15]。另外,有研究还发现血清学阳性患者中,约有8%~30%为假阳性反应[16-19]。因此,如何建立一种快速灵敏且无假阳性的诊断方法是开展人群布病流行病学工作的迫切需求。
2.近年来,多重PCR技术已广泛应用于微生物的检测鉴定工作之中[20,21]。多重PCR是在常规PCR基础上发展而来的一种聚合酶链式反应,它可在同一个PCR反应体系内同时进行多个靶序列扩增,具有特异性强、敏感度高等优势[23–25],但由于该法所检测序列相对较短,对目标病毒的分离鉴定有一定的影响,无法作为病毒分离培养前的初筛手段应用。因此,如何设计合适的引物,是决定多重PCR能否应用于病原体早期快速检测的关键所在。 本研究中,我们选择布鲁氏菌属中最常见的三种菌种B. abortus, B. melitensis 和 B. suis 的16S rRNA 基因作为检测靶标,设计了1对包含三个靶序列的多重 PCR引物, 建立了同时检测B. abortus,B. melitensis and B. suis 三种布鲁氏菌的新型多重PCR诊断方法。经敏感性试验、特异性试验、重复性试验及临床样本验证表明:新型多重PCR检测方法具有良好的灵敏度和特异性;不同浓度的阳性标准品的 Ct值之间差异显著(P<0.05);最低检出浓度达到每ml含1×104 CFU/ml;可用于检测临床样本中的布鲁氏菌,具有较好的临床应用前景。